| Q-1 |
NEDO完全長cDNAプロジェクト由来のクローンは全てNBRCから分譲を受けられますか？ |
| A-1 |
申し訳ありませんが、NBRCは旧へリックス研究所（HRI）と東京大学医科学研究所（IMS-UT）由来のクローンを分譲しております。かずさDNA研究所由来のクローンは分譲致しておりません。
DDBJ/GenBank/EMBLで各クローンのコメント欄の作成機関名に「HRI」もしくは「IMS-UT」が引用されているクローンがNBRCからの分譲対象クローンになります。もし、かずさDNA研究所（KDRI）が引用されている場合は、http://www.kazusa.or.jp/NEDO/のホームページをご参照ください。 |
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| Q-2 |
クローニングされているベクターについて教えてください。 |
| A-2 |
pME18S-FL3又はpUC19-FL3の２種類のベクターにクローニングされています。クローンに添付した書類にベクターの種類が記載してあります。cDNAは各ベクターの２つのDra
III 制限酵素切断部位間にクローニングされています。クローニング後はDra III部位は失われていますので、cDNAをDra
IIIで切り出すことはできません。pUC系の複製起点を持っていますので、各クローンを大腸菌で容易に増幅することが可能です（選択マーカー、アンピシリン耐性遺伝子。使用濃度50µg/ml）。各ベクターのマップと塩基配列はこちらを参照ください。 |
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| Q-3 |
２種類のベクターの違いを教えてください。 |
| A-3 |
ほとんどのcDNAがpME18S-FL3にクローニングされています。pME18S-FL3は培養細胞で使用できますが、pUC19-FL3は培養細胞では使用できません。pME18S-FL3は培養細胞での複製と遺伝子発現のためにSRαプロモーターとSV40由来の16S
イントロンとpolyAシグナル部位を持っています。 |
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| Q-4 |
cDNAを確認するためのプライマー配列を教えてください。 |
| A-4 |
pME18-FL3用のプライマー配列は以下のとおりです。
5'末端側: ME-FW (TAC GGA AGT GTT ACT TCT GC)
3'末端側: ME-RV (TGT GGG AGG TTT TTT CTC TA)
pUC19-FL3にはM13系、pUC系ベクター用の各種M13プライマーが使用できます。当機構では下記のプライマーが使用できることを確認しています。
5'末端側: M13-M4 (GTT TTC CCA GTC ACG AC)
3'末端側: M13-RV (CAG GAA ACA GCA TTG AC) |
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| Q-5 |
cDNAはどのような形態で送られてきますか？ |
| A-5 |
1.5ml チューブにDNA乾燥品としてお送りしています。適当量の純水又はTEバッファーに溶かしてから各種実験にお使いください。 |
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| Q-6 |
cDNAの量はどのくらいですか？ |
| A-6 |
1チューブにつき、約1µg含んでいます。 |
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| Q-7 |
cDNAの組換え体は分譲していますか？ |
| A-7 |
組換え体として分譲はしておらず、DNAのみとなっております。 |
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